Ⅰ. Gaucher's disease
1. 선정 사유
희귀난치병중 하나인 고세병은 몸속의 낡은 세포들을 없애는 데 도움을 주는 글루코세레브로시데이즈(glucocerebrosidase)라는 효소가 유전자 이상으로 결핍되어 생기는 유전병이다. 한국에 고세병과 같은 희귀난치병을 앓는 인구가 점점 증가하고 있으며 그에 따라 정
3. Dye-termination sequencing
Utilizes labelling of the chain terminator
Each of the four dideoxynucleotide chain
terminators is labelled with fluorescent dyes
Now being used for the vast majority of
sequencing projects
Challenge: differences in the incorporation of the dye-labelled chain terminators
into the DNA fragment
Blast
The Basic Local Alignment Search Tool
Sanger sequencing (=chain terminator sequencing)
Sanger sequencing에서 사용하는 ddNTP. 이것은 3‘-OH가 없기 때문에 dNTP자리에 삽입될 경우 그 이후의 DNA elongation이 일어나지 않게 된다.
Sanger method의 sequencing 원리
Sanger method - dNTP뿐 아니라 ddNTP를 사용해 PCR을 수행한 후 다양한 길이의 PCR products의 3‘ nucleotide를 확인
DNA를 100% 동일한 집합으로 얻어내면 insulin gene을 cloning한 것이 된다.
추가적인 내용으로 만약 어떤 단백질의 존재를 알고 있다고 할 때, 우리가 단백질은 알고 있지만 그 단백질을 만드는 유전자를 아직 모른다고 한다면 이 유전자가 어떤 염기서열로 되어 있는지, 그리고 유전자의 구조가 어떻게 되어
DNAsequencing에 쓰입니다. 조성은 다음과 같으며 대량을 쓰므로 미리 많이 만들어놓고 필요할 때마다 희석해서 부어서 씁니다.
Commonly used electrophoresis buffers
Buffer Concentrated stock solution (per liter)
________________________________________
Tris-acetate (TAE) 50x
242 g Tris base
57.1 ml glacial acetic acid
100 ml 0.5 M EDTA (pH 8.0)
Gen
DNA를 세포 내로 주입한다
Transformation
항생제와 LacZ를 이용한 selection
4.올바른 clone을 선택한다
Plasmid DNA 분리
Restriction enzyme mapping
DNAsequencing
Gene cloning의 결과
1.원하는 유전자를 얻어낸다
유전자는 mRNA에서 얻을 수도 DNA에서 얻을 수도 있다. 이때 RNA는 각 장기마다 발현하는 정도가 다르므로
DNA를 다음과 같이 여러가지 실험에 이용할 수 있고, 실험 결과를 토대로 여러 의학적인 연구에 응용할 수가 있다.
중합효소 연쇄반응이 이용되는 실험
1) Probe로 사용할 목적으로 cloning된 이중가닥 DNA의 증폭 2) 적은 양의 mRNA로부터 특정 cDNA의 cloning 3) DNAsequencing 4) 돌연변이 검사 5) 병인성 바이러스
의과학적 접근 방식을 통해 보다 전문적으로 이해하는 것과, 질병의 정복 과정을 부족하나마 간접 리서치를 할 수 있는 좋은 기회이기에 선정하게 되었습니다.
9. Genomic DNAsequence
• Location: 15q23-q24
• Orientation: minus strand
• Size: 32561 bp
• 14 exons
• DNAsequence (Human): NC_000015